পোরসাইন সার্কোভাইরাস টাইপ-Ⅱ অ্যান্টিবডি ELISA ডিটেকশন কিট হল ভিট্রোতে শূকরের সিরামে নির্দিষ্ট PCV অ্যান্টিবডি নির্ধারণের জন্য। পরীক্ষাটি শূকর খামারের পোরসিন সার্কোভাইরাস টাইপ-Ⅱ ভ্যাকসিনের মাধ্যমে টিকা দেওয়া টিকা মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়।
নমুনা:সিরাম
সরবরাহ করা উপকরণ:
পরীক্ষা পদ্ধতি এবং ব্যাখ্যা
ধাপ 1 পরীক্ষা পদ্ধতি
1.1 ধোয়া সমাধান প্রস্তুতি
ওয়ার্কিং ঘনত্ব ওয়াশিং তরল: ব্যবহারের আগে, ধোয়ার দ্রবণটি ঘরের তাপমাত্রায় (20-25 ডিগ্রি) পুনরুদ্ধার করা উচিত এবং সমানভাবে নাড়াতে হবে যাতে এটি অভিন্ন হয়। তারপরে বিশুদ্ধ জল দিয়ে 20 বার ঘনীভূত ধোয়ার দ্রবণ পাতলা করুন (উদাহরণস্বরূপ, 5 মিলি ঘনীভূত ওয়াশিং দ্রবণ 95 মিলি বিশুদ্ধ জলে যোগ করা হয়), ভালভাবে মেশান, এবং পাতলা ধোয়ার তরলটি 2-8 ডিগ্রিতে 7 দিনের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
1.2 নমুনা প্রস্তুতি
① পুরো প্রাণীর রক্ত নেওয়া হয়েছিল, 4000rpm-এ 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল। হিমোলাইসিস ছাড়াই সিরাম প্রাকৃতিকভাবে জমাট হতে পারে।
② সিরাম নমুনা 1:25 পাতলা করুন (120ul স্যাম্পল ডাইলুয়েন্টে 5ul সিরাম নমুনা যোগ করুন) এবং পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন।
দ্রষ্টব্য: নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণগুলিকে পাতলা করার দরকার নেই।
1.3 এনজাইম কনজুগেট প্রস্তুতি
এনজাইম কনজুগেট 1:25 পাতলা করুন (120ul এনজাইম ডাইলুয়েন্টে 5ul এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন) এবং পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মেশান।
1.4 পরীক্ষা পদ্ধতি
① এনজাইম লেবেল মাইক্রোপ্লেট নিন (নমুনার সংখ্যা অনুযায়ী, বিচ্ছিন্ন করা যায় এবং বেশ কয়েকবার ব্যবহার করা যেতে পারে), এনজাইম লেবেল মাইক্রোপ্লেটে মিশ্রিত সিরামের 100ul যোগ করুন, নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নমুনার জন্য দুটি কূপ সেট করুন এবং প্রতিক্রিয়ায় নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য প্রতিটি 100ul যোগ করুন। প্লেটটি ঢেকে রাখার জন্য সিলিং প্লেট ফিল্ম ব্যবহার করে কূপের নমুনাটি আলতো করে ঝাঁকান, এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউবেট করুন।
②সিলিং প্লেট ফিল্মটি খুলুন, প্লেটের দ্রবণটি ভালভাবে ঝেড়ে ফেলুন, প্রতিটি কূপে 300µl ওয়ার্কিং কনসেনট্রেশন ওয়াশিং লিকুইড যোগ করুন এবং তারপর কূপের তরলটি ফেলে দিন। উপরের পদক্ষেপগুলি 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন এবং অবশেষে একটি পরিষ্কার শোষক কাগজে শুকিয়ে নিন।
③প্রতিটি কূপে 100µl এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন, প্লেটটি ঢেকে দিন এবং 45 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে সেঁকুন।
④সিলিং প্লেট ফিল্মটি খুলুন, প্লেটের দ্রবণটি ভালভাবে ঝেড়ে ফেলুন, প্রতিটি কূপে 300µl ওয়ার্কিং কনসেন্ট্রেশন ওয়াশিং লিকুইড যোগ করুন এবং তারপর কূপের তরলটি ফেলে দিন। উপরের পদক্ষেপগুলি 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন এবং অবশেষে একটি পরিষ্কার শোষক কাগজে শুকিয়ে নিন।
⑤প্রতিটি কূপে 100µl সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করুন, প্লেটটি ঢেকে রাখুন এবং আলো থেকে 37 ডিগ্রি দূরে 10 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
⑥প্রতিটি কূপে 50µl স্টপ দ্রবণ যোগ করুন এবং 5 মিনিটের মধ্যে ফলাফল নির্ধারণ করুন।
ধাপ 2 ফলাফলের ব্যাখ্যা
প্রতিটি কূপের OD450 মান 96-ওয়েল মাইক্রোপ্লেট রিডারে পড়া হয়েছিল।
2.1 বৈধতা
নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের গড় OD450nm মান ছিল<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥5, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.
2.2 গণনা পদ্ধতি
প্রতিটি নমুনার জন্য, সংশোধন করা নমুনা এবং নিয়ন্ত্রণ মান ব্যবহার করে নিম্নরূপ S/P গণনা করুন:
S / P=(ODনমুনা-ODNC) / (ওডিপিসি-ODNC)
2.3 ফলাফল ব্যাখ্যা
যখন S/P<0.15, it is judged as negative.
S/P 0.25 এর থেকে বড় বা সমান হলে, এটিকে ইতিবাচক হিসাবে বিচার করা হয়।
যখন 0.15 S/P এর থেকে কম বা সমান<0.25, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.
