উদ্দেশ্য ব্যবহার: সংক্রামকবোভাইন রাইনোট্রাকাইটিস ভাইরাসঅ্যান্টিবডি এলিসা ডিটেকশন কিট ব্যবহার করা হয়সংক্রামক rhinotracheitis নির্ধারণভিট্রোতে বোভাইন সিরামে ভাইরাস অ্যান্টিবডি।
নমুনা: সিরাম
সরবরাহ করা উপকরণ:
পরীক্ষা পদ্ধতি এবং ব্যাখ্যা
ধাপ 1 পরীক্ষা পদ্ধতি
1.1 ধোয়া সমাধান প্রস্তুতি
Working ঘনত্ব wছাই তরল:ব্যবহারের আগে, ধোয়ার দ্রবণটি ঘরের তাপমাত্রায় (20-25 ডিগ্রী) পুনরুদ্ধার করা উচিত এবং এটিকে অভিন্ন করার জন্য সমানভাবে ঝাঁকাতে হবে। তারপর বিশুদ্ধ জল দিয়ে 20 বার ঘনীভূত ধোয়ার দ্রবণ পাতলা করুন (উদাহরণস্বরূপ, 95 মিলি বিশুদ্ধ জলে 5 মিলি ঘনীভূত ধোয়ার দ্রবণ যোগ করা হয়), ভালভাবে মেশান, এবং পাতলা ধোয়ার তরলটি 2-8 ডিগ্রিতে 7 দিনের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
1.2 নমুনা প্রস্তুতি
① পুরো প্রাণীর রক্ত নেওয়া হয়েছিল, 4000rpm-এ 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল। হিমোলাইসিস ছাড়াই সিরাম প্রাকৃতিকভাবে জমাট হতে পারে।
② সিরাম ডিলিউশন প্লেটে 50 বার পরীক্ষা করার জন্য সিরাম পাতলা করুন (উদাহরণস্বরূপ: 147ul নমুনা ডাইলুয়েন্টে পরীক্ষা করার জন্য 3ul সিরাম যোগ করুন)।
দ্রষ্টব্য: নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণগুলিকে পাতলা করার দরকার নেই
1.3 পরীক্ষা পদ্ধতি
① এনজাইম লেবেল মাইক্রোপ্লেট নিন (নমুনার সংখ্যা অনুসারে, বিচ্ছিন্ন করা যায় এবং বেশ কয়েকবার ব্যবহার করা যেতে পারে), এনজাইম লেবেল মাইক্রোপ্লেটে মিশ্রিত সিরামের 100ul যোগ করুন, নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য দুটি কূপ সেট করুন এবং যথাক্রমে ভালভাবে প্রতিক্রিয়াতে 100ul যোগ করুন। প্লেটটি ঢেকে রাখার জন্য সিলিং প্লেট ফিল্ম ব্যবহার করে কূপের নমুনাটি আলতো করে ঝাঁকান, এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউবেট করুন।
②সিলিং প্লেট ফিল্মটি খুলুন, প্লেটের দ্রবণটি ভালভাবে ঝেড়ে ফেলুন, প্রতিটি কূপে 300µl ওয়ার্কিং কনসেনট্রেশন ওয়াশিং লিকুইড যোগ করুন এবং তারপর কূপের তরলটি ফেলে দিন। উপরের ধাপগুলি 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন এবং অবশেষে একটি পরিষ্কার শোষক কাগজে শুকিয়ে নিন।
③ পাতলা এনজাইম কনজুগেট: এনজাইম কনজুগেট (80×) 80 বার পাতলা করুন (উদাহরণস্বরূপ: 10ul এনজাইম কনজুগেট কনসেনট্রেট + 790উল নমুনা পাতলা, প্রয়োজনীয় নির্দিষ্ট পরিমাণ পরীক্ষার নমুনার সংখ্যা অনুসারে গণনা করা হয়), ভালভাবে মেশান এবং আলাদা করে রাখুন।
④প্রতিটি কূপে 100µl এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন, প্লেটটি ঢেকে রাখুন এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে সেঁকুন।
⑤ওয়াশিং এনজাইম প্লেট, নির্দিষ্ট অপারেশন উপরের ② হিসাবে একই.
⑥প্রতিটি কূপে 100µl সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করুন, প্লেটটি ঢেকে রাখুন এবং আলো থেকে 37 ডিগ্রি দূরে 10 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
ধাপ 2 ফলাফলের ব্যাখ্যা
প্রতিটি কূপের OD450 মান 96-ওয়েল মাইক্রোপ্লেট রিডারে পড়া হয়েছিল।
2.1 বৈধতা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের গড় OD450nm মান ছিল <0.25 এবং ধনাত্মক নিয়ন্ত্রণের গড় OD450nm মান 0.6 এর চেয়ে বেশি বা সমান, পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি বৈধ ছিল। অন্যথায়, পরীক্ষা পুনরাবৃত্তি করা উচিত।
2.2 গণনা পদ্ধতি
প্রতিটি নমুনার জন্য, সংশোধিত নমুনা এবং নিয়ন্ত্রণ মান ব্যবহার করে নিম্নরূপ S/P গণনা করুন:
2.3 ফলাফল ব্যাখ্যা
যখন S/P <0.2 হয়, তখন এটিকে নেতিবাচক হিসাবে বিচার করা হয়।
যখন S/P > 0.3, তখন এটি ইতিবাচক হিসাবে বিচার করা হয়।
যখন 0.2 এর থেকে কম বা সমান S/P 0.3 এর থেকে কম বা সমান, তখন এটি সন্দেহজনক হিসাবে বিচার করা হয় এবং এক সপ্তাহ পরে নমুনা এবং পরীক্ষা পুনরাবৃত্তি করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
